LISPOT法來源于ELISA，相比較傳統(tǒng)的ELISA法有所突破，是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合，傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。80年代，國外的科研工作者根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理，建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和CK分泌細胞的固相酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)（ELISPOT）。
ELISPOT的起源可以追溯到1963年Jerne等人創(chuàng)立的溶血空斑技術(shù)（hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF），這項技術(shù)可用于檢測并計數(shù)單個抗體形成細胞。隨著單克隆抗體技術(shù)的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法檢測脾細胞中分泌特異性抗體的細胞數(shù)，發(fā)現(xiàn)該方法敏感性高簡便易行。后來，他們又用這種方法定量分析受到有絲分裂原刺激的外周血中分泌IFN2γ的細胞數(shù)。隨后，用ELISPOT法在單細胞水平檢測分泌其他細胞因子（如IL-2 ， IL-4 ， IL-5 ， IL-10 ， TNFα和IL-6） 數(shù)量的手段也被建立起來。Nordstrom 等用生物素-抗生物素蛋白生物放大法來提高這種方法的敏感性，Herr用計算機輔助圖像分析系統(tǒng)（computer-assisted video image analysis ，CVIA） 自動分析TNF2α酶聯(lián)免疫斑點的大小和數(shù)量，計算與負載抗原肽的靶細胞接觸后外周血單核細胞（PBMC） 中抗原特異性CD8+T細胞的數(shù)量，不但提高了對背景染色的分辨力也使大規(guī)模研究成為可能。Vaquerano等將數(shù)碼相機和計算機結(jié)合起來，開發(fā)出類似的斑點計數(shù)系統(tǒng)，認為當每孔斑點數(shù)大于100時，這種方法更客觀、可重復性高且節(jié)省時間。
隨著ELISPOT技術(shù)的不斷發(fā)展，它的優(yōu)勢也漸漸顯示出來，下面將ELISPOT與ELISA法對比區(qū)分。
ELISA 通過顯色反應，在酶標儀上測定吸光度，與標準曲線比較得出可溶性蛋白總量。
ELISPOT 也是通過顯色反應，在細胞分泌這種可溶性蛋白的相應位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點，可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑點或通過計算機輔助的分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù)， 1個斑點代表1個細胞，從而計算出分泌該蛋白的細胞的頻率。（某些研究不僅要測細胞因子生成量，還需檢測分泌此細胞因子的細胞頻率）
由于是單細胞水平檢測，ELISPOT比ELISA更靈敏，能從20萬-30萬細胞中檢出1個分泌該蛋白的細胞。
捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗，在研究者以刺激劑激活細胞時，不會影響活化細胞分泌細胞因子。
目前ELISA法仍在研究當中占有著主流地位，ELISA試劑盒的普遍應用使得實驗更加方便、經(jīng)濟和準確，ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點也決定了它的發(fā)展?jié)摿Α?/p>
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號3463室
主營產(chǎn)品：酶聯(lián)免疫試劑盒，食品農(nóng)殘檢測，細胞系，培養(yǎng)基，胎牛血清
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號：滬ICP備14033764號-3 總訪問量：1252225 站點地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線 管理登陸
